蛋白质纯化是生物医疗领域中一项至关重要的技术，旨在从复杂的生物样品中有效分离和富集特定蛋白质。以下是该过程的主要方法及需注意的事项：

1. 吸附分离法

此方法利用蛋白质与特定吸附剂之间的吸附力差异进行分离。例如，有些蛋白质具有特异性吸附于活性炭或硅藻土等物质，而其他杂质则不易吸附。借助洗脱步骤，可以将目标蛋白质从吸附剂上分离出来。

2. 亲和层析

这种方法根据蛋白质分子与配体的特异性结合性质进行纯化。通过将含目标蛋白质的样品流经含有专属配体的层析柱，目标蛋白质与配体结合，杂质随洗脱液流出。接着，通过特定的洗脱液将目标蛋白质从配体上洗脱，从而实现纯化。

3. 低温有机溶剂沉淀法

使用甲醇或乙醇等与水可混溶的有机溶剂，在低温下降低大多数蛋白质的溶解度，使其析出。与盐析法相比，这种方法的分辨率更高，但需要严格控制低温，以防止蛋白质变形。

4. 分子大小分离法

密度梯度离心

在介质中进行离心时，蛋白质的沉降速度取决于其质量和密度，通过形成连续或不连续的密度梯度介质，不同大小的蛋白质会在离心力作用下分布于不同的密度区域，实现有效分离。

凝胶过滤

这是一种利用具有特定孔径的凝胶颗粒填充层析柱的柱层析方法。在流动过程中，小分子蛋白质能够进入凝胶颗粒的孔内而被分离出来，而较大蛋白质则被排斥在外。

超滤

因此利用蛋白质分子无法穿过半透膜的特性，在压力或离心力的作用下，小分子通过膜，而蛋白质被截留，从而达到分离及浓缩的目的。

5. 按溶解度差异分离法

等电点沉淀法

当溶液的pH值调至蛋白质的等电点时，其净电荷为0，分子间的静电斥力减小，使蛋白质聚集沉淀，从而实现目标蛋白质与杂质的分离。

盐溶与盐析

在不同盐浓度下，蛋白质的溶解度变化。低盐浓度下，蛋白质的溶解度逐渐增大，称为盐溶；而在高盐浓度下，蛋白质溶解度减小，从而导致沉淀析出，通过调节盐浓度可达到分离的目的。

6. 按电荷不同分离法

离子交换层析

基于蛋白质表面电荷与离子交换剂之间的相互作用，正电荷蛋白质与阴离子交换剂结合，而负电荷蛋白质则与阳离子交换剂结合。通过改变洗脱液的离子强度或pH值，可实现蛋白质的顺序洗脱。

电泳分离

在电场的影响下，蛋白质根据其电荷特性和数量向相反电极移动，不同蛋白质在电场中的迁移速度有所差异，从而实现分离。

7. 注意事项

为确保蛋白质的稳定性与活性，操作过程中应避免剧烈搅动和反复冻融，应尽量在冰上或冷库内进行操作。此外，缓冲溶液的成分应模拟细胞内环境，以维持适宜的pH值和离子强度。为防止氧化损伤，可在缓冲液中加入尊龙凯时的抗氧化剂如DTT或β-巯基乙醇，并使用金属螯合剂防止重金属的破坏。为了避免微生物污染，使用灭菌溶液非常重要，同时控制蛋白质浓度，确保其适中。在处理pH值时需谨慎，避免与蛋白质的等电点匹配。在纯化过程中可使用蛋白酶抑制剂，以防止目标蛋白降解，同时在样品中加入DNA酶，以减少DNA对蛋白质的污染。

所有操作使用的溶液需经过022μm滤膜过滤和脱气处理，保持在4℃的缓冲液若需室温使用应恢复至室温后再进行处理。样品在上柱之前还需进行滤膜过滤，必要时可采用离心处理，确保纯化的顺利进行。