**RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指南**

一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：第一次建议1:2传代，转移情况：每两天替换培养基。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便进行后续比较实验。如对比实验效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞抵达后，待培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，以确保运输过程的细胞活性。收到细胞后，应使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台中进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态再进行进一步处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片为重要的售后依据，如未提供照片，默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，收集培养瓶中的完全培养液至离心管中，保留5ml培养基于37℃、5% CO2培养。如果细胞密度超过80%，可进行传代，步骤如下：

1. 弃去上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA）至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞已大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻轻拍打培养瓶后添加超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 吸出完全脱落的细胞，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，离心后去除上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1：2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞形态变化，待其收缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使之脱落，转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），快速在37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 翌日，用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

一些细胞在运输过程中可能不牢固，脱落是正常现象。处理方法包括：将培养液收集于离心管中，1000 RPM离心5分钟后，收集上清作比较培养，再加入胰酶1-2ml，轻轻吹打以重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再次离心、去上清后，补加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例分瓶传代，最后放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

五、售后条款

1) 细胞出现问题可重发的情况：如运输过程中细胞出现丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发；如48小时内反馈细胞污染，请提供实验结果，将核实后重发；若细胞在长时间静置后未复苏好（需提供具体细胞状态照片），也可申请重发。其他情况需具体核实后再做判断。
2) 不予重发的情况：客户造成细胞污染，操作不当导致细胞状态不佳，以及非本库推荐的培养体系使用，均不予重发；如收到后及时未反馈状况，亦不予重发。

通过遵循上述步骤和注意事项，可以有效地培养和维护RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞，确保细胞活性和实验结果的可靠性。我们始终致力于为客户提供优质的服务与支持，选择尊龙凯时，为您的生物实验提供令人满意的解决方案。